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質譜中的假陽性和假陰性什麼意思?

作者:由 譜度眾合 發表于 收藏時間:2022-07-11

假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉汙染。解決方法有:操作輕柔,防止靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外造成汙染;除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材高壓消毒;離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時,可在加標本前,將反應管和試劑用紫外光照射,以破壞存在的核酸。

假陰性是指不出現特異擴增帶,可能原因:引物設計不合理,酶失活或酶量不足,模板量太少,退火溫度不合適,迴圈次數過少,產物未及時電泳檢測等。解決方法有:重新設計引物,增加酶量或調換酶,增加模板量,調整退火溫度,增加迴圈次數,及時檢測擴增產物,一般在 48h 以內進行。

標簽: 擴增  序列  引物  PCR  條帶