現在都用什麼qPCR熒光染料？

EvaGreen 是一種用於實時定量 PCR （ qPCR ）的 DNA 結合染料。該染料的諸多優點使它遠勝於 SYBR Green I 。除了有相似的光譜特性， EvaGreen 有三個主要特點使它區別於 SYBR Green I 。

首先， EvaGreen 對 PCR 的抑制性遠小於 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 進行的 qPCR 實驗可以使用快速 PCR 步驟。同時， EvaGreen 在實驗中可以使用較高的濃度，從而獲得遠強於 SYBR Green I 擴增訊號。較高濃度的 EvaGreen 也消除了“染料重分佈”的缺陷，使 EvaGreen 既可用於多重 PCR ，也可用於高解析度（高畫質晰）熔解曲線分析（ HRM ）。該分析正被越來越多的用於 PCR 後的基因分型和異源雙鏈分析 。由於 SYBR Green I 對 PCR 的抑制性，從而要求其使用濃度必須很低，因此 SYBR Green I 無法解決由低濃度造成的染料重分佈問題，既不能用於多重 PCR 也不能用於 HRM 。同時，染料重分佈問題也可能影響常規熔解曲線的可靠性，因為低熔點的 DNA 鏈可能由於這種原因而無法檢測到 。

特性：

極高的靈敏度

· 在推薦濃度下使用時可以獲得最強的 PCR 擴增訊號。

PCR 抑制性極小

· 智慧化的“按要求釋放” DNA 結合技術使得 EvaGreen 對 PCR 的抑制遠小於 SYBR Green I 。

和快速 PCR 相容

· 對 PCR 干擾極小，從而極大的縮短了 PCR 延伸時間。

非常適合 HRM 分析

· 無“染料重分佈”缺陷，相容 PCR 後的高解析度熔解曲線（ HRM ）分析。

相容多重 PCR

· 在推薦濃度下使用時，無擴增子之間的染料遷移現象。

超強穩定性

· 在大部分生化條件下非常穩定，可在室溫下儲存並可反覆凍融。

安全性好

· 圖6 細胞膜穿透性測試表明，EvaGreen幾乎不能穿透細胞膜，安全性高

優越的相容性

· 和 SYBR GREEN I 光譜相似，和各知名品牌的 qPCR 儀器相容。 用 EvaGreen 替代 SYBR Green 1 ，毋須改變任何您目前使用的操作步驟和儀器裝置。

第二， EvaGreen 的穩定性極好。在正常的儲存、操作和 PCR 過程中不會被破壞。在緩衝溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱裡，也可以反覆凍融。與之相反， SYBR Green I 不穩定而且降解後對 PCR 抑制性更強 。

EvaGreen 降低了細胞膜透性，因而比 SYBR Green 1 更加安全。獨立實驗室的測試結果顯示， EvaGreen 既沒有誘變性也沒有細胞毒性 。相反，雖然 SYBR Green I 本身誘變性很弱，但它在細胞中可能抑制了正常 DNA 的修復機制，使其有誘變增強作用 。考慮到 PCR 的廣泛使用，其安全性應該得到足夠重視。