核酸電泳相關試劑、緩衝液的配製方法

50x TAE Buffer （pH8。5）

組份濃度2M Tris-醋酸，100 mM EDTA

配製量1 L

配製方法

1。 稱量下列試劑，置於1 L燒杯中。

Tris

242 g

Na2EDTA·2H20

37。2 g

2。 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。

3。 加入57。1 ml的醋酸，充分攪拌。

4。 加去離子水將溶夜定容至1 L後，室溫儲存。

10x TBE Buffer （pH8。3）

組份濃度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA

配製量1 L

配製方法

1。 稱量下列試劑，置於1 L燒杯中。

Tris

108 g

Na2EDTA·2H20

硼酸

7。44 g

55 g

Tris

108 g

Na2EDTA·2H20

硼酸

7。44 g

55 g

Tris

108 g

Na2EDTA·2H20

硼酸

7。44 g

55 g

2。 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。

3。 加去離子水將溶波定容至1 L後，室溫儲存。

10x MOPS Buffer

組份濃度200 mM MOPS。，20 mM NaOAc。，10 mM EDTA

配製量1L

配製方法

1。 稱量41。8 g MOPS， 置於1 L燒杯中。

2。 加約700 ml DEPC處理水，攪拌溶解。

3。 使用2M NaOH調節pH值至7。0。

4。 再向溶液中加入下列試劑。

1M NaOAc （DEPC 處理）

20 ml

0。5 M EDTA （pHB。0） （DEPC處理）

20 ml

5。 用DEPC處理水將溶液定容至1 L。

6。 用0。45 μm濾膜過濾除去雜質。

7。 室溫避光儲存。

注意：溶液見光或高溫滅菌後會變黃。變黃時也可使用，但變黑時不要使用。

溴乙錠（10 mg/ml）

組份濃度10 mg/ml溴乙錠

配製量100 ml

配製方法

1。 稱量1 g溴乙錠，加入到100 ml容器中。

2。 加入去離子水100 ml，充分攪拌數小時完全溶解溴乙錠。

3。 將溶液轉移至棕色瓶中，室溫避光儲存。

4。 溴乙錠的工作濃度為0。5 μg/ml。

注意：溴乙錠是種致癌物質，必須小心操作。

Agarose凝膠

配製方法

1。 配製適量的電泳及制膠用的緩衝液（通常是0。5×TBE或1×TAE。

2。 根據制膠量及凝膠濃度，準確稱量瓊脂糖粉，加入適當的錐形瓶中。

3。 加入一定量的電泳緩衝液（總液體量不宜超過錐形瓶的50%容量）。

注：用於電泳的緩衝液和用於制膠的緩衝液必須統一。

4。 在錐形瓶的瓶口封上保鮮膜，並在膜上扎些小孔，然後在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過程中，當溶液沸騰後，請戴上防熱手套，小心搖動錐形瓶，使瓊脂糖充分均勻熔化。此操作重複數次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時間不宜過長，每次當溶液起泡沸騰時停止加熱，否則會引起溶液過熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準，也會損壞微波爐。熔化瓊脂糖時，必須保證瓊脂糖充分完全熔化，否則，會造成電泳影象模糊不清。

5。 使溶液冷卻至 60℃左右，如需要可在此時加入溴乙錠溶液（終濃度0。5 μg/ml），並充分混勻。

注：溴乙錠是種致癌物質。使用含有溴乙錠的溶液時，請戴好手套。

6。 將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然後在適當位置處播上梳子。凝膠厚度一般在3~5 mm之間。

7。 在室溫下使膠凝固（大約30分鐘~ 1小時），然後放置於電泳槽中進行電泳。

注：凝膠不立即使用時，請用保鮮膜將凝膠包好後在4C下儲存，一般可儲存2~5天。

瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最佳分辨範圍

瓊脂糖濃度

最佳線形DNA分辨範圍（bp）

0。5%

1。000 ~ 30。000

0。7%

800~ 12。000

1。0%

500 ~ 10。000

1。2%

400 ~ 7。000

1。5%

200 ~ 3。000

2。0%

50 ~ 2。000

6x Loading Buffer （DNA 電泳用）

組份濃度

30 mM

EDTA

36% （V/V）

Glycerol

0。05% （WV）

Xylene Cyanol FF

0。05% （WV）

Bromophenol Blue

配製量500 ml

配製方法

1。 稱量下列試劑，置於500 ml燒杯中。

EDTA

4。4 g

Bromophenol Blue

250 mg

Xylene Cyanol FF

250 mg

2。 向燒杯中加入約200 ml的去離子水後，加熱攪拌充分溶解。

3。 加入180 ml的甘油（Glycerol）後，使用2 M NaOH調節pH值至7。0。

4。 用去離子水定容至500 ml後，室溫儲存。

6x Loading Buffer （RNA電泳用）

組份濃度

10 mM

EDTA

50% （V/V）

Glycerol

0。25% （WV）

Xylene Cyanol FF

0。25% （WV）

Bromophenol Blue

配製量10 ml

配製方法

1。 稱量下列試劑，置於500 ml燒杯中。

0。5 M EDTA （pH

8。0）

200 ul

Bromophenol Blue

25 mg

Xylene Cyanol FF

25 mg

0。5 M EDTA （pH

8。0）

200 ul

Bromophenol Blue

25 mg

Xylene Cyanol FF

25 mg

2。 向燒杯中加入約4 ml的DPEC處理水後，加熱攪拌充分溶解。

3。 加入5 ml的甘油（Glycerol）後，充分混勻。

4。 用DPEC處理水定容至10 ml後，室溫儲存。

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