原核生物的mRNA怎麼提取？
霧裡看霧2021-09-05 17:29:56原核生物不和真核細胞的mRNA分子一樣，不具有最顯著的結構特徵具有3‘端的Poly（A）尾巴。故而不能利用mRNA3’未端含有Poly（A+）的特點，只能透過消化周圍的其他RNA。
——來自易基因
科研小白a2021-09-05 20:59:36大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，常見有磁珠法、纖維素柱層析法等。
磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高度親和力）。實驗時生物素標記的OligoT與mRNA的polyA高效雜交形成複合體，此複合體又與標有親和素的磁珠結合。用磁性分離架就可以將這堆複合物分離出來。最後用無RNase去離子水將mRNA從複合物中洗脫下來即可。
寡聚dT纖維素柱層析法的大致流程：總RNA流經寡聚dT纖維素柱時，在高鹽緩衝液中，帶polyA尾的mRNA被特異地結合在柱上。降低鹽濃度，mRNA被洗脫。一般過兩次柱後，就可得到較高純度的mRNA。
當然有些mRNA沒有polyA尾巴，如原核生物，可透過消化周圍的其他RNA來提取，。若是不必分離mRNA的，設計好引物就也有的用總RNA做。
——from易基因科技
知乎使用者2021-09-06 00:10:43要提取原核生物的mRNA首先要提取原核生物的總RNA，原核生物有細胞壁，需要先破壁，使細胞中的RNA暴露出來，再將總RNA分離出來。真核生物的mRNA中帶有一段poly（A），可使用帶有oligoT的磁珠將其捕獲；而分離原核生物的mRNA則需要透過rRNA去除的方法去分離原核生物的mRNA。
—來自易基因的回答
JLRN2021-09-13 00:27:20知乎
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原核生物的mRNA怎麼提取？
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大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，常見有磁珠法、纖維素柱層析法等。
磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高度親和力）。實驗時生物素標記的OligoT與mRNA的polyA高效雜交形成複合體，此複合體又與標有親和素的磁珠結合。用磁性分離架就可以將這堆複合物分離出來。最後用無RNase去離子水將mRNA從複合物中洗脫下來即可。
寡聚dT纖維素柱層析法的大致流程：總RNA流經寡聚dT纖維素柱時，在高鹽緩衝液中，帶polyA尾的mRNA被特異地結合在柱上。降低鹽濃度，mRNA被洗脫。一般過兩次柱後，就可得到較高純度的mRNA。
當然有些mRNA沒有polyA尾巴，如原核生物，可透過消化周圍的其他RNA來提取，。若是不必分離mRNA的，設計好引物就也有的用總RNA做。
