色譜峰會分叉？你是不是犯了類似錯誤？
高效液相色譜法作為高效的檢測手段，應用範圍越來越廣泛，做液相色譜的同學基本都會碰到分叉峰，很多時候這都意味著硬體或者方法某些地方可能出現問題，今天我們就跟隨小析姐一起看看導致峰分叉的原因以及如何解決這個問題的吧！
1、色譜柱汙染
在開始時沒問題，在使用一段時間後出現這個問題，可能是由於汙染引起的。
這時需要對色譜柱加強沖洗，即使用比方法流動相更強的溶劑沖洗色譜柱。
圖1中使用純乙腈沖洗色譜柱消除了3號峰分叉問題。
2、保護柱失效
如果樣品基質比較髒，使用一段時間之後，發現的峰分叉或拖尾等問題，很有可能是保護柱失效造成的。
一般粗略判斷標準，塔板數、壓力或分離度的改變超過 10%，就需要更換保護柱了。保護柱是消耗品，建議直接更換，不需要再生。
3、接頭連線不正確
如果色譜柱在使用過程中發現每個峰的峰形都出現問題，先考察是否有連線問題。
管線可能太長或太短——這種情況可能導致滲漏或峰分叉/拖尾，如圖2所示。如果管線太長，密封圈位置不當，將發生滲漏。如果管線推出的距離不夠，將會產生一段死空間，形成混合腔，導致柱外體積，使峰形變壞。
如果您使用的是不同廠商的色譜柱，一定要確保使用正確的接頭，並保證色譜柱末端接頭位置正確。
安捷倫推薦帶前後墊圈的 Swagelok 型接頭，能讓安捷倫液相色譜系統獲得最佳效能。在所有儀器連線處都可以使用這種接頭，包括閥、加熱器、連線色譜柱等。進行良好連線的步驟如圖3：
4、溶劑效應
在反相 HPLC 中，
如使用 100% 有機溶劑或 100% 強溶劑
（圖4中為乙腈），
大體積進樣時，將使色譜峰過早洗脫出色譜柱，導致峰變形。
如需解決這個問題可以對分析物進行蒸發濃縮，從而減少進樣體積。或者進樣溶劑改為用水稀釋，與流動相更為相容，即使進樣體積較大也不會出現峰變形。較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現拖尾。在液相色譜中用溶於流動相的小體積進樣最為理想。
5、樣品過載
當進樣量超過柱子的容量，樣品峰會呈現分叉或拖尾，解決方案就是減少進樣量。
這種問題一般在使用小體積色譜柱是表現更為明顯，所以色譜柱方法從常規250mm或150mm長色譜柱轉化到體積較小的快速分析柱時，進樣量要按照柱體積的減小的比例而減小。
6、色譜柱塌陷
由於柱塌陷引起的峰分叉，很難修復。如果流動相pH>7或在色譜柱pH耐受範圍臨界點附近長時間使用，是比較容易造成矽膠填料溶解塌陷。如果出現色譜柱塌陷，您會看到色譜圖中的每個峰峰形都會發生變化
（峰拖尾、加寬或分叉）如圖5，短時間內可以反方向執行，建議直接更換色譜柱。日常使用的過程中注意將溫度降低到 40 ℃以下，特別是使用高 pH 流動相時；使用高溫相容色譜柱，如立體保護的矽膠柱、混合型柱、聚合物柱、氧化鋯柱等。使用特別適合在較高 pH 下操作的高覆蓋率或雙交聯固定相（比如，ZORBAX Extend-C18），或使用聚合物、混合型或氧化鋯反相柱。
（a）正常；（b）（c）柱塌陷
7、柱前篩板部分堵塞
長期分析髒樣品，如果沒有保護柱或線上柱前過濾器，顆粒物和強吸附物很可能在柱入口篩板發生堵塞，同時伴隨著壓力升高，解決辦法一般是色譜柱反衝
。1。8um粒徑的色譜柱儘量避免反衝。由於現在使用的是高效裝柱工藝，不建議更換色譜柱入口篩板，在許多色譜柱上也不可能更換。如果更換篩板，可能影響柱效。所以最好在色譜柱前安裝線上過濾器（部件號5067-4638）和保護柱。
8、色譜柱效能下降
在您使用色譜柱時，
會用其分析各種目標物、使用各種流動相併分離不同的樣品基質，經過長時間的使用，色譜柱會受到這些物質的影響發生一些微妙的變化，從而引起峰分叉、拖尾或保留時間的改變
。在使用新色譜柱時保留其測試樣品色譜圖非常重要，在使用一段時間後進行比較，就能發現效能上的變化。如果分離度下降導致不能進行良好定量，這根色譜柱就應該丟棄並更換了。
內容來源：實驗與分析
哈嘍，在文章最後想和大家再囉嗦幾句有關“儀器加”，儀器加為儀器裝置採購者、儀器裝置使用者、科研技術人員，提供儀器選購、儀器使用的知識和相關資訊的專業內容平臺。
所以哦，有關於儀器裝置相關的一些問題、知識和資訊我們都可以相互交流，在微信上搜一下公號：儀器加，也有小程式（同名），小程式上面的內容更加豐富，會涉及儀器知識、科研經驗、文獻速遞、軟體教程、科研資訊和行業動態，查詢起來非常方便，當然，有其他需求的也可以一起交流溝通哦~
