液相分泵進流動相的影響？

先說結論：有區別，但是多數情況下區別不大，大部分人也很難發現這種區別。

兩個泵分別進兩種流動相，透過流速控制混合比例，這種叫做動態混合。先在瓶子裡面混合好，只用一個泵輸送，這種叫做預混合。

預混合的效果比動態混合略微好一些

。

具體原因有點複雜，晚上有空再補充。

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補充一下：

如果考慮實驗操作，用泵混合的重現性比手動配流動相會好一些，因為目前的泵都能做到±0。002以內的重現性，配20%的流動相誤差肯定不會超過19。8~20。2的範圍。而手動配操作不好的話是很難做到這個重現性的。從這個角度講，用泵混合比手動配更準也更方便。不過液相分析中，這個問題卻不是最重要的，因為一次測試過程中很少會中途重配流動相，昨天的保留時間也很少與今天的保留時間進行比較。流動相配置的重現性差一點不是嚴重問題。

透過泵進行動態混合，主要有兩個不好的地方：

一是混合均勻性。

兩個泵的流出液透過三通匯合，然後在混合器中混勻。為了能夠充分混勻，混合器就必須有較大的體積並且產生足夠的湍流，才能起到類似攪拌的作用。但是色譜儀要求梯度延遲小、梯度響應快，這就限制了混合器的體積不能太大。所以實際使用中都是在混合均勻和延遲小這兩者之間進行折中，混合均勻性並不是最好的。

目前的UPLC我不太清楚，早一些的儀器，包括安捷倫的1100、1200、島津的LC20A這些，混合的均勻性都沒法達到手工預混合那麼好。在測試的時候表現出來的就是，手工預混合的流動相跑出來的基線更平、信噪比高一些，用泵動態混合的基線噪音會略微大一些。這種差異在紫外檢測器裡面不是很明顯，只有很仔細的比較才會發現，但是在RID裡面是非常明顯的，所以用RID的時候是不允許透過泵動態混合的。

為了混合更好，在製備色譜上有用一種動態混合裝置，就是在混合器裡面加一個攪拌裝置，就可以保證能夠達到與預先手工混合一樣的均勻度。不過這種裝置內部死體積太大，分析型色譜不能用。

第二個不好的地方是混合後體積變化的問題。

有機溶劑與水混合後體積不等於兩者加和，0。8mL甲醇+0。2mL水，體積不是正好1mL，而要少一點。不同混合比例，體積變化又都不一樣。所以在用泵動態混合的時候，A泵0。8、B泵0。2，但實際經過柱子的流速不是1，不同比例下流速差異都不同，這就讓問題更復雜了。如果有人是直接用泵混合，有人是手動預先混合，結果就會有明顯差異，甚至出現一些說不清的問題。為了重現性好，到底怎麼混合的最好說明。

在梯度洗脫的時候，以上兩個問題都會存在，所以梯度洗脫的重現性和信噪比會比等度洗脫差一點。當然，對於比較好的儀器，這種差異是很小的。