引物的定義是什麼(求完整的、規範的解答)?
感謝
@張耘暢
的邀請。
今天晚上要去動物房看看SCID長得如何,不排除要殺一兩隻來看看感染,所以先作Mark, 晚點時間再來補充。
1。RNA鏈作為引物的情況
1953年的DNA分子雙螺旋結構提出來以後, 當時大家就思考著DNA要如何複製本身。
有過高中學習經歷都知道一個半保留複製,也就是DNA雙鏈在複製時會開啟,各自為模版進行復制,得到的新的DNA雙鏈中,一條來自母鏈,一條是新鏈。
隨後的發展就是研究清楚DNA複製的分子細節,就是有哪些酶參與,有哪些事件發生。
發現的DNA聚合酶的一個特性就是不能從頭合成,要先有一段,再接著合成。
這一個從頭的一段是從哪裡來的? 結果是又發現有一種酶,稱之為primase(合成primer的酶),它一開始與複製起始複合體結合,會產生一條10-13nt長的RNA鏈,而這條鏈就是會產生一個3‘-OH來,讓DNA聚合酶開始合成。而在複製過程中,RNA引物在利用完後會被酶切除。
問題出現了,DNA聚合酶(就是用於合成DNA的酶)不能從頭合成一段DNA,那根據上面所說,RNA聚合酶(就是用於合成RNA的酶)就能從頭合成一段RNA了?
嗯,就是這樣!生物中就是有各種各樣的沒有規律。
對於一些負鏈RNA病毒,也是會利用此類機制,生成DNA。
2。PCR反應中,以DNA鏈來作為引物。
PCR反應中,根據要擴增的片斷資訊,要提供上下游的引物。
這個引物一般是一些公司合成的,長度在20nt左右。
3。以上兩個區別:
RNA引物是在體內使用,序列不固定,長度10nt左右,利用完就刪除。
DNA引物是在體外使用,序列固定(根據擴增片斷所確定),長度20nt左右。
4。設計引物是一項基本的技能,有好多軟體實現。
我在本科時很喜歡這些東西,鑽研了不少,但是在實踐工作中,這些不太有用。
我現在的工作思路:
要測量一個基因的表達,去文獻中查詢相關的引物資訊,多找幾個,在primerblast中比對下。
再合成幾對來做測試。
這比自己用軟體合成要有道理得多,因為這是從魚缸裡釣魚,而軟體是從湖裡釣魚。
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