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熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

作者:由 王歡 發表于 舞蹈時間:2015-12-16

謝邀。

1)你作圖的結果是正確的,得到的 3D熒光光譜(激發-發射譜)也沒有什麼問題。儲存後再打開發現不一樣是因為觀察的視角發生了變化,你只用點選三維旋轉鍵就能把視角轉回來。如下圖紅框中所示的工具,點選你的3D圖後會自動顯現工具欄。

熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

2)旋轉的同時,座標軸的標識會跟著一起旋轉,調整到合適的位置後停止調整就行了。

3)如果要繪製等高線圖,全選 Matrix 表格裡的資料,然後點選Origin 工具欄上的 Plot ——> Contour ——> color fill ,或者下圖中的快捷圖示。

熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

4)實驗結果分析只能靠你自己了,不是所有人都做過你的實驗,沒法具體給出建議。

最後,一點原理上的建議。熒光發射譜的波長採集是從激發波長的長波方向採集的。如下圖所示,

熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

熒光猝滅的三維熒光譜圖繪製?

處於電子基態(S0)分子吸收光子後躍遷到第一電子激發態(S1)的各個振動態(這就是吸收光譜的原理)。經過短暫弛豫後(fs量級) 布居到 S1態的振動基態,然後向電子基態躍遷,同時發射光子(這就是熒光光譜的原理)。一般而言,S1態的振動基態能級到S0態振動基態能級之間的能量差是發射譜的最大能差。因此熒光發射譜對應的能量不可能大於此能差。換句話說,熒光發射譜的最短波長不可能小於此能差對應的波長。

回到你的實驗中,激發波長範圍是 210 - 360 nm,那麼採集的發射譜波長的範圍應該從 215 或者 220 nm開始採集,且每一次更改激發波長,對應的起始採集波長都應該相應增加。但是一般而言,自動採集的3D熒光激發光譜只能傻瓜設定,沒法根據激發波長的變化動態調節採集範圍。於是就導致了採集的光譜中會出現一條強度很強、而且半高全寬(FWHM)比較窄的“發射帶”,你仔細觀察光譜就能發現,這一條“發射帶”實際上就是你設定的激發光。你貼的中間兩個圖A中顯示的 peak a 就屬於此類。 至於 peak b,這裡就涉及到非線性光學的一點知識了。peak b 實際上是 peak a(也就是激發光)的半頻峰,即頻率為激發光的一半,波長是激發光的兩倍。peak a 和 peak b 都不是樣品的訊號,屬於干擾峰,不需要分析。你只用關注於半高全寬比較大的那個峰就可以了。

至於如何分析你的光譜,回到(4)。 我只能幫你到這裡了。 Good luck :-)

標簽: 波長  PEAK  激發  採集  發射