做WB還不懂怎麼選擇marker？愛必信詳解送上

同學們做WB首先要了解你需要的

蛋白marker

，通常可分為：

1、未預染的Marker即寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準；

2、染的Marker即單色預染和多色預染。

在western Blot過程中，分子量Marker往往對實驗結果有著不可忽視的作用。這個Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量精確無誤了，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以

選擇正確的蛋白Marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。

一. 未染色(premixed)蛋白分子量標準

由於沒有附帶染料分子或者是標記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以未染色的蛋白分子量標準是最簡單，也是最準確的一種。現在的marker多數都選用預混和的Marker，方便不同大小的蛋白比較。預混的Marker通常有幾條帶加倍濃度作為指示，因為混合的條帶越多，不好辨識。所以當看到特別濃的那幾條標誌帶就記得是哪裡了。不過要記得，小帶通常都不那麼容易看清楚的。在選擇上來說，當然是選擇其中至少有一條條帶和自己的目的蛋白大小相近的最好，越近越好。如果你的蛋白不幸在兩條跨度較大Marker條帶之間，則需選取適當跨度mark。預混的Marker使用上不如預染Marker，因為電泳過程中完全看不到，必須要結合目標蛋白方可使用，無法對實驗起參照作用。

二.預染蛋白分子量標準

預染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物，透過與染料共價耦聯，在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到。預染蛋白分子量的出現方便了我們的實驗，這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳後，以及轉膜後監測電泳情況和估計遷移率——比如，已知垂直電泳最佳分辨區域大約在膠的2/3處，如果使用預染Marker就可以預測目標蛋白進入最佳分辨區時停止電泳以得到最佳分辨效果；如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳；另外在Western Blot轉膜以後可以直接觀察蛋白轉膜是否完全，還可以在膜上標記蛋白分子量，所以吸引了許多實驗室人員購買預染蛋白標準。值得注意的是預染蛋白Marker與染料共價耦聯，所以在不同的緩衝條件下電泳時遷移特性可能會發生某些變化，可能導致一些偏差，所以不太適合精確定位蛋白——不過多數情況下Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白完全一樣，我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小，最後都需要Western來定性，所以如果不是要區分大小相近的條帶，預染Marker還是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用。

預染蛋白標準可以分為兩種：單色預染和多色預染，其實區別就在於幫助在實驗過程中辨認某個條帶的大小——Marker條帶越多參考價值越大，可就越難辨認區分，如果用不同的顏色來區別就比較好辨認。如果沉悶的電泳實驗中跑出五顏六色的彩虹Marker，單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的。還有一點特別要注意，由於轉膜是一個將膠裡的Marker濃縮在透明膜上，所以需要的上樣量相對少一些，如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹”，或者單色的Marker往往需要比說明書裡多加一些Marker的。

愛必信為您提供三色

預染蛋白標準Mark

，含12種高度純化預染的蛋白質，涵蓋10至245kD的各種分子量，在PVDF、 NC或者nylon膜都可適用。