有頭吳腦說行為：阿片樣肽在中樞上水平對小鼠熱板法痛閾和排便的調節

有頭吳腦說行為，大家好，我是吳文遠。本文的目的是探究阿片樣肽（hemorphin-4）在中樞上水平對熱板致痛小鼠的痛閾調節及其對小鼠排便的影響。方法（1）選擇昆明系雌性小鼠，透過側腦室埋管實現中樞給藥；（2）熱板模型，是測定中樞水平急性痛的經典方法，以“舔後足”為痛反應指標；（3）以糞便顆粒數和總乾重來評價藥物對排便的調節。

嗎啡、芬太尼等傳統阿片類藥物，多是μ阿片受體的選擇性激動劑。然而，μ阿片受體的啟用，常常會誘發耐受、便秘、呼吸抑制等副作用，致使其應用和推廣受到極大限制。因此，本實驗透過熱板模型和排便實驗，更進一步地評價hemorphin-4在中樞上水平對熱痛和排便的調節。

1。材料與方法

1。1材料

昆明系小鼠購自成都達碩生物科技有限公司。hemorphin-4透過固相多肽合成法合成，RT-HPLC，Naloxone，戊巴比妥鈉。

1。2給藥方式

側腦室埋管參考之前的報道。腹腔注射戊巴比妥鈉（70ｍｇ/kg）麻醉小鼠，並置於腦立體定位儀，

腦立體定位儀，型號：XR5001，上海欣軟

以ＢｒEｇｍａ點為參考（後移0。6ｍｍ、側移1。2ｍｍ、深1。7ｍｍ），將26Ｇ不鏽鋼套管固定於腦顱骨。單隻單籠飼養5-7天后，進行後續實驗。利用微量進樣泵注射（3μＬ／2min），留針1min防止迴流。實驗結束後，注射藍墨水檢測埋管位置。

1。3熱板模型

選擇雌性小鼠，並記錄其“舔後爪”的潛伏時間。基於前期預備工作，55。5℃的熱板使得大多數小鼠在5-10ｓ出現舔後足，剔除過於敏感或遲鈍的小鼠。為避免組織燙傷，將截至時間定為30ｓ。本實驗，以3次給藥前痛閾值的平均數為該只小鼠的基礎痛閾值，以側腦室給藥後5min、10min、20min、40min時的潛伏時間為給藥後痛閾值，參考下述公式計算最大鎮痛效應百分率（ＭPE％）：ＭPE％＝（給藥後痛閾值-基礎痛閾值）／（30-基礎痛閾值）×100％。

1。4排便實驗

排便實驗，可以更好地反映便秘症狀。參考之前的報道，以給藥後30min內糞便顆粒數和總乾重來評價藥物對排便的調節。實驗的關鍵在於，在埋管小鼠的恢復期，務必讓小鼠充分適應實驗員，以避免捉拿以及側腦室注射刺激小鼠排便。

1。5資料分析資料以“平均值±標準差”表示，用單因素方差分析中的ＢｏｎｆEｒｒｏｎｉ法進行組間比較，P<0。05表示差異具有顯著性。每個實驗組至少5-7只小鼠。

2結果

2。1 hemorphin-4在熱板模型中的鎮痛作用如圖1所示，

側腦室注射hemorphin-4（3-30μｇ）調節熱板致痛小鼠的舔足潛伏期。

在熱板模型中，側腦室注射hemorphin-4（3-30μｇ）表現出顯著的劑量和時間依賴性的鎮痛作用，而且在10min時出現了鎮痛的峰值。因此，我們選擇10min時的鎮痛效果為代表，更詳細地比較給藥前後小鼠痛閾值的變化（表1）。

相較於基礎痛閾值，側腦室注射生理鹽水對舔後足潛伏期沒有影響。與之相比，即使小劑量的hemorphin-4（3μｇ）也可以顯著地延遲小鼠的舔後足潛伏期，而在10μｇ和30μｇ的劑量時，小鼠的舔後足潛伏期甚至延遲了2-3倍，呈現出一定的劑量依賴性。

熱板刺痛儀，型號：XR1700，上海欣軟

2。2 Naloxone對hemorphin-4鎮痛的影響

為探究 hemorphin-4的鎮痛機制，提前10min皮下注射阿片受體的非選擇性拮抗劑 Naloxone（2mg/kg）。如表２所示，與“生理鹽水＋生理鹽水” 組相比， Naloxone預處 理 對 中 樞 注 射 生 理 鹽 水 的 痛 閾值沒有 影 響，卻 能 夠 非 常 顯 著 地 阻 斷 30μｇhemorphin-4所引起的鎮痛。

表2 Naloxone對hemorphin-4鎮痛的影響

2。3hemorphin-4對小鼠排便的調節

由表3可以看出，與生理鹽水組相比，30μｇ的hemorphin-4對糞便顆粒數量及乾重沒有影響，而只有高劑量的hemorphin-4（100μｇ）才能夠有效地抑制小鼠的正常排便。

表3 側腦室注射hemorphin-4對小鼠排便的調節

3討論

甩尾反應屬於脊髓調節的條件反射，而舔後足行為則有延髓等高位中樞的參與，這是甩尾模型與熱板模型的本質區別

。

鼠尾光照測痛儀，型號：上海欣軟

有文獻報道顯示，阿片類化合物PＺＭ21對小鼠甩尾潛伏期沒有影響，卻顯著且持久地延遲小鼠舔後足的潛伏期。因此，基於he-morphin-4在甩尾模型中顯著的鎮痛作用，本實驗拓展鎮痛模型，探究hemorphin-4在中樞上水平對熱板致痛小鼠的痛閾調節。由表1可知，側腦室注射hemorphin-4（3-30μｇ）能夠劑量依賴地延遲熱板致痛小鼠舔後足的潛伏期。該鎮痛作用幾乎被ｎａｌｏｘｏｎE完全阻斷（表2），表明hemorphin-4可能是透過阿片受體的啟用發揮鎮痛，這一結果與hemorphin-4關於受體親和及甩尾鎮痛的報道一致。比較hemorphin-4在熱板和甩尾兩個模型中的鎮痛活性，我們發現，10μｇhemorphin-4在熱板模型中的鎮痛效果略低於甩尾模型中50μｇhemorphin-4所產生的鎮痛作用。hemorphin-4在熱板模型中表現出更高的鎮痛活性，雖然可能是小鼠的種系差別或性別差異等，但更關鍵的原因或許可歸因為阿片受體在高位中樞有更集中的分佈。相較於hemorphin-4在熱板模型中的顯著鎮痛，同等劑量的hemorphin-4（30μｇ）對小鼠的正常排便沒有影響，意味著hemorphin-4在發揮有效鎮痛時不會誘發便秘，這或許與hemorphin-4的三重配體活性（μ、δ、κ阿片受體）有關。有關he-morphin-4在術後痛、神經痛等經典模型中的痛調節，及其對依賴、耐受、呼吸抑制等典型阿片副作用的調節，值得更進一步的探索。總而言之，本研究結果顯示，hemorphin-4在熱板模型中表現出比甩尾模型更高的鎮痛活性，在發揮鎮痛作用時不會誘發便秘。

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