如何選擇抗體

檢測任何目標蛋白的抗體不止一種，同一家抗體公司可能有好幾種，甚至幾十種。在不同的抗體公司，則更多。那麼在眼花繚亂的抗體陣中，如何選擇自己實驗需要的抗體呢？主要考慮以下因素：分析自己的實驗應用實驗方法是什麼？分析中的標本屬於哪種動物或人？分析樣品中蛋白質的結構性質，分析抗體的標記和檢測，分析抗體的宿主來源種類等。

1.分析自己實驗應用的實驗方法是哪種？

我們愛必信的抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用於何種分析型別，如：可以應用於

WB

、

IHC

、ICC、

ELISA

、FCM分析等。

如果我們的抗體說明書沒有提及的應用型別，並不意味著該抗體不適用於此種分析應用型別，而僅是說明尚未經過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用某些分析試驗，則會在抗體說明書上標註出來不適於某分析試驗。

2.分析自己實驗中標本的種屬是哪種動物或人的？

一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用於何種動物或人的標本，如：可以用於rat、mouse、human、pig、goat等動物的標本的實驗。也就是說應選擇物種相同或有交叉反應的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應，因其氨基酸序列同源性較高。

如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應種屬表中，並不意味著該抗體不適用於檢測該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測驗證過。為了避免實驗風險，儘量不要使用說明書中沒有提及的標本的種屬的抗體。或者透過序列比對的方法來預測交叉反應，可應用Expasy和NCBI BLAST來進行不同物種蛋白同源性比對。如果比對結果，證明同源性比較高的，也可以選擇。

3.分析樣本中的蛋白質的結構性質

瞭解樣本蛋白的結構性質有助於選擇最合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮待測樣本蛋白的結構域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而製備得來，其中的免疫原包括：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細菌）或細胞，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區域，則必須選擇用含此片段域的免疫原製備出的抗體。如果打算用FCM流式檢測活細胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫製備的抗體。

樣本的提取或處理過程：某些抗體要求樣本經過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結構阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識別天然摺疊狀態的蛋白。當選擇免疫組化的抗體時，應注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用於無需抗原修復解交聯步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應用部分標示出來。

4.抗體宿主物種的選擇

一般說來，在使用偶聯二抗結合無偶聯物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇較為重要，對於免疫組化而言，儘可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內源性免疫球蛋白產生交叉反應，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不應選擇小鼠或大鼠源的一抗，最好選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯了檢測分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。如果選擇有偶聯物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對不含內源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對不含IgG的細胞裂解物樣本的western blotting檢測，儘管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含IgG，在western blot檢測中則結合出現IgG分子50 and 25 kDa的重鏈和輕鏈條帶。